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      蜂膠超臨界CO2萃取物的GC指紋圖譜研究

      日期:2017年8月30日 14:46

      蜂膠是蜜蜂從植物的芽孢、樹皮或莖桿的傷口采集的樹脂與自身分泌物的混合體,它是植物有效成分經過動物深加工的產物,結合了動植物雙重功能優勢,特別適合人體的吸收和利用。
      蜂膠的成分非常復雜,現已發現含有300多種有效成分,包括30多種人體必需的微量元素、20多種氨基酸、30多種黃酮類物質,以及豐富的萜烯類、酶類、多糖等具有生物學活性的天然成分。超臨界CO2萃取是安全、高效的高新分離技術,被廣泛地應用于天然資源活性物質的提取。從作者已有研究可知,與傳統的乙醇萃取物相比,蜂膠的超臨界CO2萃取物組分種類更為豐富,尤其是含有大量具有抗癌效果的萜烯類、酯類物質,其免疫活性更為顯著。通過GC-MS分析證明,蜂膠超臨界CO2萃取物中含有90多種組分。如何建立一種相對簡便且科學的分析方法,是識別是否為蜂膠超臨界CO2萃取物的重要依據,對于促進蜂膠超臨界CO2萃取物制品的規范化生產有著重要的意義。為此,本文提出就蜂膠超臨界CO2萃取物的氣相色譜(GC)指紋圖譜的建立進行深入的研究。
      1 測試材料與儀器
      樣品:蜂膠的超臨界CO2萃取產物、蜂膠的醇提產物,江蘇大學生物資源工程重點實驗室提供。
      儀器:HP5890A氣相色譜儀、HP3395積分儀、FID 檢測器、交聯聚乙烯乙二醇毛細管色譜柱,美國惠普公司。
      2 色譜條件
      色譜柱:HP-INNOWAX 交聯聚乙烯乙二醇毛細管色譜柱,檢測器: FID離子化檢測器。
      進樣溫度和檢測溫度均為250℃,爐溫210℃,載氣為高純氮,其流速為30ml/min。
      用正己烷配制濃度為4%(v/v) 的樣品溶液,每次進樣1ul 。用HP3395 積分儀記錄圖譜,并通過面積歸一化計算各組分的相對含量。
      3 試驗方法與結果
      3. 1 供試品溶液的制備
      稱取蜂膠樣品1000g,置于超臨界CO2萃取釜中,在35℃、25MPa下進行萃取3h,得到蜂膠的超臨界CO2萃取物102g。取該萃取物1g,用氯仿以0.05g/ml的濃度進行溶解,濾去少量不溶物,并定容至20ml,作為進行GC指紋圖譜檢測定供試樣品。
      3. 2 分折方法學研究
      精密吸取樣品0.2μL,注入氣相色譜儀中,按色譜法進行試驗,測定并記錄圖譜。為了考察分析方法的可靠性,對其穩定性、儀器精密度、實驗方法的重現性作了相應的考察,結果證明穩定性及重現性良好。
      3. 2. 1 穩定性試驗
      取同一樣品,分別在4天內每天進行檢測,在每組中選峰4??疾鞓悠分兄饕V蜂的保留時間的一致性,試驗結果顯示。相對保留時間RSD 均小于0.48%,因此穩定性較好。
      3. 2. 2 精密度試驗
      取上述對照品溶液0.2μL ,連續重復進樣5次,考察色譜峰保留時間的一致性。結果顯示,各主要色譜峰相對保留時間RSD均小于0.25%。
      3. 2. 3 重現性試驗
      稱取蜂膠樣品5份,按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液,考察圖譜中主要色譜峰的保留時間的一致性。各主要色譜峰保留時間RSD 均小于0.46%。
      3. 3 蜂膠超臨界CO2萃取物GC指紋圖譜共有峰的確定
      7份不同蜂膠供試品溶液GC圖譜主要峰的相對保留時間可見,在7份蜂膠供試品溶液的GC 圖譜中,17個色譜峰的
      相對保留時間范圍在0.20%~0.52%之間變化,相對偏差RSD小于0.55%,變化均非常穩定。因此可以確定17個主要峰為共有峰。由于蜂膠超臨界CO2萃取物各主要組分會因為萃取條件的改變,其共有峰的面積會有所變化,因此認為以共有峰的相對保留時間作為蜂膠超臨界CO2萃取物GC指紋圖譜的特征指標比較適宜。7份供試品溶液GC 圖譜共有峰的峰面積如表所示,共有峰中峰面積范圍在4.9 %~70.38%之間變化,該數值說明,盡管不同蜂膠供試品在主要組分的含量上有較大的差異,但其主要組分的種類基本不變。
      3. 4 蜂膠超臨界CO2 萃取物GC 指紋圖譜的檢驗
      為了檢驗以上建立的蜂膠超臨界CO2萃取物GC指紋圖譜的合理性,本文以蜂膠的乙醇提取產物為受試對象、進行了GC圖譜的檢測,其結果可以發現二者在組分構成上有很大的差異、指紋圖譜的特征區別明顯,蜂膠超臨界CO2萃取物的易揮發性成分遠遠豐富于醇提蜂膠。
      4 討論
      通過7份樣品的GC圖譜,以譜峰的保留時間為考察指標,確定出17個出峰時間比較穩定的譜峰為共有峰,用17個共有峰來識別蜂膠超臨界CO2萃取物的真偽和質量好壞。通過對蜂膠醇提物GC圖譜的測定,發現不同提取方法得到提取物在產品品質上有極其顯著的差異。

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